Page 103 - Докторська дисертація_Ткачук

103

2.7.2. МТТ-аналіз функціональної активності клітин

Для визначення впливу досліджуваних зразків титанових сплавів із

модифікованими поверхневими шарами на проліферативну активність, 104

клітини висівали у лунку 24-лункового планшета та інкубували у середовищі,

яке містило досліджувані зразки, упродовж 72 чи 192 год. За 2 год до

завершення періоду інкубації в середовище додавали MTT-реагент, 3-(4,5-

диметилтіазол-2-іл)-2,5-диметилбромід тетразолію з концентрацією

500 мкг/мл. Після завершення інкубації в лунки додавали диметилсульфоксид

для розчинення фіолетових кристалів формазану, що утворилися внаслідок

відновлення МТТ-реагенту мітохондріальними дегідрогеназами живих клітин.

Концентрацію формазану в лунках визначали спектрофотометричним

методом на апараті Plate Reader BioTek за оптичним поглинанням при довжині

хвилі 490 нм. Відносну кількість живих клітин визначали у відсотках від

контролю за співвідношенням величин оптичної густини.

2.7.3. Цитоморфологічні дослідження

Для проведення цитоморфологічних досліджень титанових сплавів із

модифікованими поверхневими шарами використовували флуоресцентний

мікроскоп Carl Zeiss із системою AxioImager A1 (рис. 2.15).

Для забарвлення живих клітин використовували наступні флуоресцентні

барвники:

 флуоресцентний барвник Hoechst 33342 (Sigma, США), який специфічно
взаємодіє з ДНК ядра, і таким чином використовується для візуалізації

ядер клітин (довжина хвилі збудження 361 нм, довжина хвилі емісії
486 нм). Робоча концентрація – 0,2-0,5 мкг/мл.